細(xì)胞換液是指去除舊的培養(yǎng)基,換成新的培養(yǎng)基以繼續(xù)提供細(xì)胞充足的營養(yǎng)支持。當(dāng)舊培養(yǎng)基 ph 值改變(含酚紅的培養(yǎng)基通常是變酸發(fā)黃)時,需要及時進行換液。在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,換液是一項非常常規(guī)操作,它主要是為了清除細(xì)胞在生長過程中產(chǎn)生的各種代謝廢物,補充新鮮的培養(yǎng)基,促進細(xì)胞生長。細(xì)胞換液主要有全換液和半換液兩種方式,那么,不同方式的換液方法如何更換細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的溶液呢?
換液前工作準(zhǔn)備
環(huán)境準(zhǔn)備:相對密封、防塵、防菌的無菌室
操作者準(zhǔn)備:雙手清潔呈可操作狀態(tài)
物品準(zhǔn)備:超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。
工作準(zhǔn)備:預(yù)熱培養(yǎng)基,酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜/超凈工作臺。
細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出的細(xì)胞,酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超凈工作臺??梢陨缘却?,待生物安全柜中的循環(huán)風(fēng)將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后,擰開培養(yǎng)基瓶蓋虛掩,擰開培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩,培養(yǎng)皿蓋不用擰。
第一種方式:細(xì)胞全換液
如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮培養(yǎng)基。
細(xì)胞全換液具體步驟
1.將器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,若是培養(yǎng)的細(xì)胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌。另外,細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。
2.從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒,轉(zhuǎn)移到超凈臺,打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基,注意一定不要從細(xì)胞貼壁面加入培養(yǎng)基,應(yīng)從側(cè)壁加,動作輕柔,以免沖落細(xì)胞。
3.加好培養(yǎng)基后,蓋上蓋子,在瓶子上做標(biāo)記,注明換液時間,細(xì)胞種類,操作人員等信息。
4.放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴瓶子表面,然后應(yīng)記得整理操作臺,用酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。
第二種方式:細(xì)胞半換液
“細(xì)胞半換液"又稱“細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去。選它的原因其實與前面不加PBS的理由有點相近。
半換液原因
1.給細(xì)胞提供適應(yīng)的緩沖環(huán)境;
2.細(xì)胞生長過程中可能會分泌某些生長因子,促進生長;
3.節(jié)省材料
4.方便操作:比如96孔板,換液很麻煩。所以常采用排槍進行半換液;
5.對于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),有時也會選用半換液減低細(xì)胞密度;
以上是通蔚生物帶您了解細(xì)胞換液的方式有哪些,希望可以幫助到大家。上海通蔚生物科技有限公司以質(zhì)量求生存,細(xì)胞以信譽求發(fā)展的精神,精益求精,力求做到更好,不管是過去還是現(xiàn)在和將來,全體員工將再接再厲,以的服務(wù)態(tài)度,全新的精神面貌,為廣大新老客戶,提供的產(chǎn)品和售后服務(wù),讓我們攜手共創(chuàng)美好未來!
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